您好!欢迎访问优利科(上海)生命科学有限公司网站!
全国服务咨询热线:

15021281375

当前位置:首页 > 技术文章 > 伊氏锥虫(TE)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)

伊氏锥虫(TE)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)

更新时间:2022-04-21      点击次数:940

【产品名称】

通用名称:伊氏锥虫(TE)核酸检测试剂盒(荧光 PCR )

NameDiagnostic Kit for Trypanosoma evansi DNA(PCR-Fluorescence Probing

【包装规格】50T/

【预期用途】 本试剂盒适用于检测脑海马回部组织、全血等样本中的伊氏锥虫,用于伊氏锥虫感染的辅助诊断,其检测 结果仅供参考。 

【检验原理】 本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对伊氏锥虫特异性引物,结合一条特异性探针, 用荧光 PCR 技术对伊氏锥虫DNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

包装规格50T/
TE 反应液500μL×2
酶液50μL×1
TE 阳性质控品50μL ×1
阴性质控品250μL ×1

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】 -20±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】 ABI 、安捷伦 MX3000P/3005PLightCyclerBio-RadEppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】 病死或扑杀动物的脑海马回部组织 2g;待检活动物,抽取全血 5mL EDTA-2Na 抗凝管

【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输, 严禁反复冻融。

【使用方法】 1. 样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理 组织样品:每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 1.5mL 灭菌离心管中;咽拭子样品直接取 100μL 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2 核酸提取 推荐采用优利科(上海)生命科学有限公司生产的核酸提取或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提 取,请按照试剂说明书进行操作。

2. 试剂配制(试剂准备区) 根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 10 份,多配制 1 ),每测试反应体系配制如下表:


试剂TE 反应液酶液
用量(样本数为 N20μL1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。

3. 加样(样本处理区) 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀, 短暂离心。

4. PCR 扩增(核酸扩增区)


4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内; 4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL; 荧光通道选择: 检测通道(Reporter DyeFAM, 淬灭通道(Quencher DyeNONEABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择 None 即可。


4.3 推荐循环参数设置:

步骤循环数温度时间收集荧光信号
11 cycle9510min
240 cycles9415sec


5530sec


5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定 设置 Baseline Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像 调节 Baseline start (一般可在 3~15 范围内调节)stop (一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold Value (上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2 结果判断 阳性:检测通道 Ct ≤35,且曲线有明显的指数增长曲线; 可疑:检测通道 35<Ct ≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35<Ct ≤38,且曲线有明显的增长曲线, 判定为阳性,否则为阴性; 阴性:样本检测结果 Ct >38 或无 Ct 值。

6. 质控标准 阴性质控品:Ct>38 或无 Ct 值显示; 阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct ≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7. 检测方法的局限性 1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关; 2.样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果; 3.阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果; 4.病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果; 5.不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果; 6.试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果; 7.本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】 1.所有操作严格按照说明书进行; 2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化,*混匀并短暂离心; 3.反应液应避光保存; 4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧; 5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服; 6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染; 7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器; 8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


优利科(上海)生命科学有限公司
地址:金大公路8218号1幢
邮箱:1431486511@qq.com
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息
Baidu
map