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分享一下荧光PCR检测试剂盒具体的操作流程

更新时间:2022-11-17      点击次数:1463
  荧光PCR检测试剂盒采用荧光PCR技术,通过荧光信号的变化检测犬线粒体基因的特异性序列。该试剂盒适用于鉴定多种样本中是否含有犬源性基因成份。作用原理:所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
  荧光PCR检测试剂盒具体的操作流程:
  1.整个检测过程应严格按照本手册的要求在试剂制备区、样品处理区和PCR扩增区进行。各区域的实验服、仪器和耗材应单独使用,不得混用;实验中采用了带滤芯的吸头;样品处理区应配备生物安全柜,在其中进行样品处理;三个区域应配备紫外线消毒装置。
  2.为避免RNA降解,样品处理过程应在0-4℃下进行,实验完成后应立即进行计算机检测;样品处理中使用的仪器和耗材应在不含核酶的情况下进行处理。
  3.应为每个实验设置阴性和阳性对照。
  4.试剂盒中的所有试剂在使用前应在室温下充分熔化和混合,并应立即离心。
  5.试剂盒中的所有阴性和阳性对照品应转移到样品制备区,并在使用前单独储存。
  6.为了防止荧光干扰,必须避免徒手直接接触PCR反应管,并避免PCR反应管上的任何标记。
  7.仪表放大的相关参数应根据本手册的相关要求进行设置;不同批号的试剂不能混合。
  8.在实验过程中,产品废弃物应在丢弃前进行无害化处理。
  荧光PCR检测试剂盒检测方法的局限性有什么?
  1、样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
  2、样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
  3、阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
  4、病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
  5、不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
  6、试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
  7、本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
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