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细胞培养操作步骤

更新时间:2023-09-25      点击次数:566
细胞培养(cell culture)是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。
细胞培养操作步骤:(供参考)
吸走多余培养基,加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞;
吸干净PBS后加入1mL0.25%胰酶-0.53mM EDTA,轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面,培养瓶放37度培养箱消化;(细胞对于消化比较敏感,消化过度会严重影响细胞状态,导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落,可以轻轻吹下时即可终止,禁止消化到细胞漂浮。混匀细胞时尽量轻柔,不要吹出大量气泡。)
加入6-8ml培养基终止消化,轻轻吹下细胞混匀;
将混匀的细胞1000rpm(约150g)离心3min,弃上清,再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养(建议T25瓶加10-12ml培养基,10cm皿加12-15ml);传代比例: 不同细胞生长速度不一,具体传代比例视细胞生长速度而定,大部分细胞适用1:3-1:4传代,生长较慢的细胞可以1:2传代。
细胞冷冻保存:
1.冻存液:92%培养基+8%DMSO(可以根据实验室条件自行选择)。
2.降温步骤:4度10min,-20度2h,-80过夜后液氮保存。
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