总巯基测定试剂盒说明书

总巯基测定试剂盒说明书

分光光度法  50 管/24 样注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质， 而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH 含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。

测定原理

巯基基团与 5,5’- 二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有最大吸收峰。

自备实验用品

天平、研钵、可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 40 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 3 mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品的制备

（1）   动物、植物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心 10min， 取上清，置冰上待测。

（2）   血清，培养液：直接测定。

操作步骤