甘油三酯（triglyceride, TG）含量测定试剂盒说明书

甘油三酯（triglyceride, TG）含量测定试剂盒说明书

                                               微量法100T/96S

注   意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

TG是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。

测定原理：

用异丙醇提取TG，脂蛋白酯酶水解TG生成甘油和脂肪酸（FFA），甘油与三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成H₂O₂，过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在505 nm处有特征吸收峰。

自备仪器和用品：

酶标仪、台式离心机、可调式移液枪、96孔板、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配置：

试剂一：液体120 mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体12 mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体12 mL×1瓶，4℃避光保存。

TG的提取：

1、   组织中TG的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即TG待测液。

2、细胞、细菌中TG的提取：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，离心后弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），8000g，4℃离心10min，取上清，即TG待测液。

3、血清（浆）样品：直接测定。

测定操作：

酶标仪预热30min，调节波长到505 nm。

混匀，室温下静置20min，于505 nm波长处读取吸光值，记为A空白和A测定，△A=A测定-A空白。空白管只需测一管。

计算公式：

标准曲线：y = 0.3261x - 0.0199； R² = 0.9979；x：标准品浓度（mg/mL） y：吸光值差值ΔA。

1. 血清（浆）中甘油三酯含量计算：

TG含量（mg/mL）=（ΔA+0.0199）÷ 0.3261=3.07×（ΔA+0.0199）

2. 组织、细菌或细胞中甘油三酯含量计算：

(1)按样本蛋白浓度计算

TG含量（mg/ mg prot）= (ΔA+0.0199)÷0.3261×V样÷(Cpr×V样）=3.07×（ΔA+0.0199）÷Cpr

(2)按样本质量计算

TG含量（mg/ g 鲜重）=（ΔA+0.0199）÷0.3261×V样÷(W×V样÷V样总）=3.07×（ΔA+0.0199）÷ W

V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入试剂一体积，1 mL；W：样本质量，g；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。

注意事项：

1. 试剂盒中有易挥发性物质，实验过程中需佩戴手套和口罩，试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。

2. Z低检出限为100μg/mL。