生物碱含量试剂盒说明书

生物碱含量试剂盒说明书

微量法100 管/96 样

注   意 ：正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：

生物碱存在于自然界（主要为植物，但有的也存在于动物）中的一类含氮的碱性有机化合物， 大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。

测定原理：

生物碱与溴甲酚绿指示剂反应，生成绿色化合物，在 416nm 处有最大吸收峰。

需自备的仪器和用品：

酶标仪、水浴锅、超声波清洗器、可调式移液器、96 孔板、研钵、80%乙醇、氯仿和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体 12mL× 1 瓶，4℃保存； 试剂二：液体 30mL × 1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 15mL × 1 瓶，4℃避光保存；

生物碱的提取：

样本烘干粉碎，过 80 目筛。称取约 0.1g 样本，加入 0.1mL 试剂一，再加入 0.9mL80%乙醇， 充分混匀后转移到EP 管中，超声波提取 60min， 8000 g，25℃离心 10 min，取上清液待测。另取空 EP 管，加入 0.1mL 试剂一和 0.9mL80%乙醇，混匀后作为空白液。

测定步骤：

1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 416nm 处。

2、操作表：在EP 管中加入如下试剂

混匀，室温静置 5min

剧烈振荡混匀，室温静置 40min，吸取下层氯仿层 200µL 于 96 孔板，416nm 处读取吸光值

A，ΔA=A 测定-A 空白，空白管只要做一管。

生物碱含量计算：

标准条件下测定的回归方程为 y = 1.915x - 0.0005，R2 = 0.9942；x 为标准品浓度（mg/mL），

y 为 ΔA。

生物碱含量(mg/g 干重)=(ΔA+0.0005)÷1.915×V 样总÷W= 0.522×(ΔA+0.0005) ÷W

V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g。