土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒说明书

土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒说明书

                                                 微量法100T/48S

注   意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

测定原理：

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

自备实验用品及仪器：

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板，甲苯、蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体65mL×1瓶，4℃避光保存。

样品处理：

新鲜土样风干，过30-50目筛。

测定操作表：

计算公式：

a.        用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值ΔA。

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V反总÷W÷T×1000

= 598×（ΔA +0.0007）

V反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL

b.       用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=2.6357x-0.0007，R2=0.9989；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值ΔA。

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷2.6357×V反总÷W÷T×1000

= 1195×（ΔA +0.0007）

V反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL

注意事项：

试剂一充分混匀后再使用。