土壤酸性转化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）试剂盒说明书

土壤酸性转化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）试剂盒说明书

                                        微量法100管/48样

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

S-AI在pH 为4.5~5.0（酸性）条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。

测定原理：

S-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收增加速率与AI活性成正比。

自备用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存;

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入25mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存;

试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存；

样品处理：

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

测定步骤和加样表：

混匀， 37℃准确水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，以防水分散失），流水冷却后

充分混匀（以保证浓度不变），10000g 25℃离心10min，取上清液

混匀，95℃水浴10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀， 510nm处，记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)，ΔA=A测定-A对照。

S-AI活性计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。

单位的定义：每天每g土样中产生1mg还原糖定义为一个S-AI活力单位。

S-AI活力（mg/d /g土样）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V反总÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)

V反总：反应体系总体积：0.4mL；T：反应时间，1/48d； W：样本质量，0.05g；1mg=1000μg。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0008x -0.001；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。

单位的定义：每天每g土样中产生1mg还原糖定义为一个S-AI活力单位。

S-AI活力（mg/d/g土样）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V反总÷W÷T ÷1000=480×(ΔA+0.001)

V反总：反应体系总体积：0.4mL；T：反应时间，1/48d； W：样本质量，0.05g；1mg=1000μg。