土壤纤维素酶（Solid-cellulase，S-CL）活性测定试剂盒说明书

土壤纤维素酶（Solid-cellulase，S-CL）活性测定试剂盒说明书

                                          微量法100管/48样

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

S-CL主要来源于土壤微生物，S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。

测定原理：

采用蒽酮比色法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品：

酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、甲苯、硫酸（不允许快递）和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自备）

试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体40mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存； 临用前加入5mL蒸馏水和45mL浓硫酸充分溶解待用。

样品处理：

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

加样表和测定步骤：

37℃振荡反应3h后，90℃水浴15min（盖紧，防止水分散失），冷却后

8000g 25℃离心10min，取上清，得糖化液

混匀， 90℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，测620nm下吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

S-CL活力计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 5.018x - 0.0462；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

单位的定义：每天每g土样中产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-CL活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反总÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)

T：反应时间，3h=1/8d； V反总：反应体系总体积：0.6mL；W：样本质量，0.05g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 2.5090x - 0.0462；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

单位的定义：每天每g土样中产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-CL活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462) ÷2.5090×V反总÷W÷T =38.3×(ΔA+0.0462)

T：反应时间，3h=1/8d； V反总：反应体系总体积：0.6mL；W：样本质量，0.05g。