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新品推荐|多聚半乳糖醛酸酶(PG)试剂盒

更新时间:2023-04-08      点击次数:1674

关于新品推荐|多聚半乳糖醛酸酶(PG)试剂盒说明书

  微量法100T/48S

   意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)是一种细胞壁结合蛋白,可以催化果胶分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解,参与果胶的降解,使细胞壁结构解体,导致果实软化,与果实成熟、叶和花的脱落、病原物防御,细胞伸展发育以及木质化有关,在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域具有较高的研究价值。

测定原理:

多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸,具有还原性醛基,与DNS试剂反应生成红棕色物质,在540nm有特征吸收峰,测定540nm处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体8mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。

酶液提取:

1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。16000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后16000g4℃离心10min,取上清置于冰上待测。

3.培养液:直接检测。

测定操作表:


对照管

测定管

样本(μL


30

煮沸样本(μL

30


试剂一(μL


120

蒸馏水

120


40℃水浴30min

试剂二(μL

150

150

沸水浴5min,冰浴或自来水冷却,取200μL于微量石英比色皿/96孔板测定540nm处吸光值A,△A=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

酶活性计算公式

a.        用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 3.9642x - 0.008R2 = 0.9996x为标准品浓度,mg/mLy为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:40℃,pH6.0条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/mg prot= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷V×Cpr÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:40℃,pH6.0条件下,每克样本每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷V×W÷V样总)÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷W

3.按液体体积计算

酶活性定义:40℃,pH6.0条件下,每毫升培养液每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/mL=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷V÷T=2.523×(ΔA+0.008)

4. 按细胞数量计算

酶活性定义:40℃,pH6.0条件下,每104个细胞每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/104cell=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量    

V反总:反应总体积,0.15mLV样:反应中样本体积,0.03mLV样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,0.5h

 

b.       96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 1.9821x - 0.008R2 = 0.9996x为标准品浓度,mg/mLy为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:40℃,pH6.0条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/mg prot=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷V×Cpr÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:40℃,pH6.0条件下,每克样本每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。

PG活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷V×W÷V样总)÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷W

3.按液体体积计算

酶活性定义:40℃,pH6.0条件下,每毫升培养液每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。

PG活性(mg/h/mL=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷V÷T=5.045×(ΔA+0.008)

4. 按细胞数量计算

酶活性定义:40℃pH6.0条件下,每104个细胞每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。

PG活性(mg/h/104cell=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷细胞数量

V反总:反应总体积,0.15mLV样:反应中样本体积,0.03mLV样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,0.5h

注意事项:

煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸10分钟,以将酶彻di灭活。


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