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牛病毒性腹泻病毒(BVDV)荧光PCR试剂盒

简要描述:牛病毒性腹泻病毒(BVDV)荧光PCR试剂盒适用于检测的牛的肠粘膜、肠系膜淋巴结组织、排泄物等标本中牛病毒性腹泻病毒核酸,适用于牛病毒性腹泻病毒感染的辅助诊断。

  • 更新时间:2024-06-26
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:453

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10136P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
英文名称Bovine?Viral?Diarrhea?Virus?Detection?Kit?(Real-Ti保存条件-20℃±5℃?,避光保存
有效期12?个月

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)荧光PCR试剂盒

产品名称:

通用名称:牛病毒性腹泻病毒(BVDV)荧光PCR试剂盒

Name:Bovine Viral Diarrhea Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method) 50T/盒

包装规格:50T/盒

预期用途:

本试剂盒适用于检测的牛的肠粘膜、肠系膜淋巴结组织、排泄物等标本中牛病毒性腹泻病毒核酸,适用于牛病毒性腹泻病毒感染的辅助诊断。

检验原理:

本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对牛病毒性腹泻病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光 PCR 技术对牛病毒性腹泻病毒的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

试剂组成:

包装规格

50T/盒

BVDV 反应液

500μL×2 管

酶液

50μL×1 管

BVDV 阳性质控品

50μL ×1 管

阴性质控品

250μL ×1 管

说明: 不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

保存条件及有效期:

-20℃±5℃ ,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

适用仪器:

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

标本采集:

病死或扑杀牛,取肠粘膜、肠系膜淋巴结组织; 待检活牛,取排泄物,放入 1mL50%甘油生理盐水中。

保存和运输:

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输, 严禁反复冻融。

使用方法:

1.样本处理(样本处理区)

样本前处理

A组织样品: 每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术/剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心2min,取上清液 100μL于 1.5mL 灭菌离心管中; 咽拭/子样品直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

B核酸提取

推荐采用公司生产的核酸提取/或纯化试剂(磁珠法或离心柱法) 进行核酸提取,请按照试剂说明书进行操

作。

2.试剂配置(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照; 样品每满

10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

BVDV 反应液

酶液

用量(样本数为 N)

20μL

1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21μL/管。

3.加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,

短暂离心。

4.PCR扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为  25μL;

荧光通道选择:   检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择

ROX 参比荧光,选择None 即可。

4.3  推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

42℃

20min

2

1 cycle

95℃

10min

3

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec







5.结果分析判定

5.1结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~ 15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2结果判断

阳性: 检测通道 Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑: 检测通道 35<Ct 值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38 ,且曲线有明显的增长曲线, 判定为阳性,否则为阴性;

阴性: 样本检测结果Ct 值>38 或无 Ct 值。

6.质控标准

阴性质控品: Ct>38 或无 Ct 值显示;

阳性质控品: 扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7.检测方法的局限性

1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

3.  阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

4. 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

5. 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

6. 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

7. 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

注意事项:

1. 所有操作严格按照说明书进行;

2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,wan全混匀并短暂离心;

3. 反应液应避光保存;

4. 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》 进行处理


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