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还原型抗坏血酸(AsA)含量测定试剂盒

简要描述:还原型抗坏血酸(AsA)含量测定试剂盒测定意义:
AsA又称维生素C。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂,AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。

  • 更新时间:2024-06-29
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:633

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH138
规格100管/96样、50管/48样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、可见分光光度法

还原型抗坏血酸(AsA)含量测定试剂盒说明书

                                                

微量法100T/96S

 

    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AsA又称维生素CAsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂,AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。

 

测定原理:

 在乙酸溶液中,抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物,在最大吸收波长420处测定吸光度。

 

自备仪器和用品:

研钵、冰、低 温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体4mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×2瓶(棕色),4℃避光保存。临用前配制,每瓶加入7 mL蒸馏水充分溶解,用不完的试剂4℃下可保存3天。

 

样品中AsA提取:

1.        组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。8000g4℃离心20min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);8000g4℃离心20min,取上清液置冰上混匀待测。

3.  血清等液体:直接测定。

 

AsA测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到420 nm,蒸馏水调零。

2.EP管中加入下列试剂

试剂名称(µL

测定管

空白管

样本

100


提取液


100

试剂一

30

30

试剂二

50

50

试剂三

120

120

700

700

混匀,25℃静置20min,吸取200µL加入微量石英比色皿/96孔板中,420nm下测定各管吸光值。ΔA=A测定-A空白。

注意:标准管只需测定一次。

 

AsA含量计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线y = 0.0088x - 0.018 R2 = 0.9978

(1). 按蛋白浓度计算

AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V÷Cpr×V样)

=113.63×(ΔA+0.018)÷Cpr

(2). 按样本质量计算

AsA(μg/g 鲜重) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V÷(W×V÷V样总)

=113.63×(ΔA+0.018)÷W

(3). 按细胞数量计算

AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V÷(细胞数量×V÷V样总)

=113.63×(ΔA+0.018)÷细胞数量

4)按液体体积计算

AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0088

=113.63×(ΔA+0.018)

V样:加入样品体积,0.1mLV样总:加入提取液体积,1.0 mL; Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mLW:样品质量(g)。

 

b.使用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线y = 0.0044x - 0.018 R2 = 0.9978

(1). 按蛋白浓度计算

AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V÷Cpr×V样)

=227.27×(ΔA+0.018)÷Cpr

(2). 按样本质量计算

AsA(μg/g 鲜重) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V÷(W×V÷V样总)

=227.27×(ΔA+0.018)÷W

(3). 按细胞数量计算

AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V÷(细胞数量×V÷V样总)

=227.27×(ΔA+0.018)÷细胞数量

4)按液体体积计算

AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0044

=227.27×(ΔA+0.018)

V样:加入样品体积,0.1mLV样总:加入提取液体积,1.0 mL; Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mLW:样品质量(g)。

 

注意事项:

 

试剂三现配现用,配制好的4℃保存,3天内使用完。

还原型抗坏血酸(AsA)含量测定试剂盒仅供科研!

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