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羧酸酯酶(CarE)活性测定试剂盒

简要描述:羧酸酯酶(CarE)活性测定试剂盒测定意义:
哺乳动物CarE,也称脂族酯酶(aliesterase),广泛分布于组织和器官,属于丝氨/酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解,但不能催化水解乙酰胆/碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢,并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关,有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。

  • 更新时间:2024-06-29
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:582

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH132
规格100管/96样、50管/48样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、可见分光光度法


羧酸酯酶(CarE)活性测定试剂盒说明书

                                               微量法 100T/96S

 

 

   正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

哺乳动物CarE,也称脂族酯酶(aliesterase),广泛分布于组织和器官,属于丝/氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解,但不能催化水解乙酰胆/碱及其类似物CarE参与脂质运输和代谢,并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关,有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。

 

测定原理:

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固篮显色;在450 nm光吸收增加速率,计算CarE活性。

 

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

 

试剂组成和配置:

试剂一:液体×1瓶,4保存。

试剂二:液体15mL×2瓶, 4℃保存;

试剂三:粉剂×2支, 4℃保存,临用前取1支试剂三,加0.6ml无水乙醇充分溶解;

试剂四:粉剂×2支,-20℃保存,临用前取1支试剂四,加少量试剂二溶解;

工作液配制:临用前配制,向1瓶试剂二中,加入溶解后的试剂三和试剂四各1支,充分溶解,过滤4℃避光保存,可用1周。

 

粗酶液提取:

细菌、细胞样品制备

收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200万细菌或细胞加入400μL试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次);12000g 4离心30min,取上清液待测。

2、组织:按照组织质量(g:试剂一体(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆12000g 4离心30min,取上清液待测。

3、液体:直接测定

 

测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到450 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37水浴中预热30 min

3. 空白管:微量玻璃比色皿/96板,依次加入5μL蒸馏水和200μL试剂二,迅速混匀,于450nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A1,第190s吸光值记为A2A空白管=A2-A1

4. 测定管:取微量玻璃比色皿/96板,依次加入5μL上清液和200μL试剂二,迅速混匀,于450nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A3,第190s吸光值记为A4A测定管=A4-A3

 

注意:空白管只需测定一次。

 

CarE活性计算公式

a.        使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1 组织中CarE活性

(1)         按蛋白浓度计算

CarE活性单位定义:mg组织蛋白在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1酶活单位

 

CarE酶活(U/mg prot)= (A测定管-A空白管) ×V反总÷(Cpr×V)÷T

= 13.67×(A测定管-A空白管)÷Cpr

(2)         按样本鲜重计算

CarE活性单位定义:g组织在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1酶活单位

CarE酶活(U/g 鲜重)= (A测定管-A空白管) ×V反总×V样总÷V样)÷W÷T

=13.67×(A测定管-A空白管)÷W

2 细菌或细胞中CarE活性

CarE活性单位定义:1万个细菌或细胞在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为一个CarE活性单位。

CarE酶活(U/104 cell)= (A测定管-A空白管) ×V反总×V样总÷V样)÷细胞密度(104 cell/mL÷T=13.67×(A测定管-A空白管细胞密度(104 cell/mL

3. 液体中CarE活性

CarE活性单位定义:毫升样品37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1酶活单位

CarE酶活(U/mL )= (A测定管-A空白管) ×V反总÷V÷T

=13.67×(A测定管-A空白管)

V反总:反应体系总体积,205μL=2.05×10-4LV样总:上清液总体积,1 mLV样:加入上清液体积(mL)0.005 mLCpr:蛋白质浓度,mg/mLW:样品质量(g);T:反应时间(min),3min

 

b.       使用96孔板测定的计算公式如下

1 组织中CarE活性

(3)         按蛋白浓度计算

CarE活性单位定义:mg组织蛋白在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1酶活单位

 

CarE酶活(U/mg prot)= (A测定管-A空白管) ×V反总÷(Cpr×V)÷T

= 13.67×(A测定管-A空白管)÷Cpr

(4)         按样本鲜重计算

CarE活性单位定义:g组织在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1酶活单位

CarE酶活(U/g 鲜重)= (A测定管-A空白管) ×V反总×V样总÷V样)÷W÷T

=13.67×(A测定管-A空白管)÷W

2 细菌或细胞中CarE活性

 

CarE活性单位定义:1万个细菌或细胞在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为一个CarE活性单位。

CarE酶活(U/104 cell)= (A测定管-A空白管) ×V反总×V样总÷V样)÷细胞密度(104 cell/mL÷T=13.67×(A测定管-A空白管细胞密度(104 cell/mL

3. 液体中CarE活性

CarE活性单位定义:毫升样品37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1酶活单位

CarE酶活(U/mL )= (A测定管-A空白管) ×V反总÷V÷T

=13.67×(A测定管-A空白管)

V反总:反应体系总体积,205μL=2.05×10-4LV样总:上清液总体积,1 mLV样:加入上清液体积(mL)0.005 mLCpr:蛋白质浓度,mg/mLW:样品质量(g);T:反应时间(min),3min


羧酸酯酶(CarE)活性测定试剂盒仅供科研!


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