您好!欢迎访问优利科(上海)生命科学有限公司网站!
全国服务咨询热线:

15021281375

当前位置:首页 > 产品中心 > 科研试剂盒 > 生化试剂盒 > 碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性测定试剂盒

碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性测定试剂盒

简要描述:碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性测定试剂盒测定意义:
AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。

  • 更新时间:2024-06-29
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:574

相关文章

Related Articles

详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH130
规格100管/48样、50管/24样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、可见分光光度法

碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性测定试剂盒说明书

                                                   微量法100T/48S



   正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:                           

AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。

 

测定原理:

在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替/比林和铁氰hua钾反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510 nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体×1瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。

标准品:液体×1支(EP管中),2 μmol/mL酚标准液,4℃保存。

 

粗酶液提取:

1.        组织:按照组织质量(g:试剂一体(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆48000g离心10min,取上清液待测。

2.        细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g4,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.        血液可直接测定,或者适当稀释后测定。

 

测定步骤:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min

3. 空白管:EP管,加入4μL蒸馏水,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A空白管。

4. 标准管:EP管,加入4μL标准品,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A标准管。

5. 对照管:EP管,加入4μL上清液,40μL蒸馏水,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A测定管。

6. 测定管:EP管,加入4μL上清液,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min

 

加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A测定管。

其中标准管和空白管只需做一管,测定管和对照管每个样均需做。

注意:空白管和标准管只需测定一次。

 

AKP/ALP活性计算:

1.        血液中AKP/ALP活力计算

活性单位定义:37中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚定义为1个酶活单位。

AKP/ALP活力(μmol/min /mL)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总] ÷V÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

2.        组织、细菌或细胞中AKP/ALP活性计算

1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:37中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μ mol酚定义为1个酶活单位。

AKP/ALP(μmol/min/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V)÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr

2)按照样本质量计算

活性单位定义:37中每克组织每分钟催化产生1 μ mol酚定义为1个酶活单位。

AKP/ALP(μmol/min/g 鲜重)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(W×V÷V样总)÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷W

3)按照细菌或细胞数量计算

活性单位定义:37中每104个细菌或细胞每分钟催化产生1 μ mol酚定义为1个酶活单位。AKP/ALP (μmol/min/104 cell)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(细胞数量×V÷V样总)÷T= 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量

 

C标准品:2μmol/mLV反总:反应体系总体积(mL),205μL=0.205mL Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司生产的BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),0.004mLV样总:提取液体积,1 mLT:反应时间(min),15 min

 

注意事项:

1.试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。

2.试剂四变蓝绿色后不能再使用。

3.加入试剂四后必须立即混匀,否则显色不wan全。

碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性测定试剂盒仅供科研!

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
优利科(上海)生命科学有限公司
地址:金大公路8218号1幢
邮箱:1431486511@qq.com
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息
Baidu
map