脂肪酸合成酶（FAS）活性试剂盒

脂肪酸合成酶（FAS）活性试剂盒说明书

微量法100T/96S

注  意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

FAS 是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶 /A 和丙二酰辅酶/ A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

测定原理：

FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP⁺；NADPH 在 340nm 有吸收峰，而 NADP⁺没有；通过测定 340nm 光吸收下降速率，计算 FAS 活性。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 100mL×1 瓶，－20℃保存。用前 1d 取出置于 4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1 瓶。临用前加入440μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入440μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂四：液体 20mL×1 瓶, 4℃保存。

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 840μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

粗酶液提取：

1.        组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心 40min，取上清置冰上待测。

2.        细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 12000g，4℃，离心 40min，取上清置于冰上待测。

3.        血清等液体：直接测定。

FAS 测定操作：

1.    分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。

2.    试剂四置于 40℃水浴中预热 30 min。

3.     在 96 孔板或 EP 管中依次加入 20μL 上清液、4μL 试剂二、4μL 试剂三、164μL 试剂四和 8μL 试剂五，混匀后于 340nm 处测定吸光值，记录第 30s 和 90s 时吸光值，分别记录为 A1

和 A2。△ A 测=A1-A2。

FAS 活性计算：

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1）按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。 FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(Cpr×V 样)÷T

=1608×△A÷Cpr

（2）按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(W×V 样÷V 样总)÷T =1608×△A ÷W

（3）按细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每 10⁴ 个细胞每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol /min/10⁴cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T =1608×△A ÷细胞数量

（4）按液体体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷V 样÷T =1608×△A

ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V 反总：反应体系

总体积，200μL=2×10^-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W ：样品质量；V 样：加入

反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min。

b.使用 96 孔板测定的计算公式如下

（1）按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹)÷(Cpr×V 样)÷T =3216×△A÷Cpr

（2）按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

⁹

=3216×△A÷W

（3）按细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每 10⁴ 个细胞每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol /min/10⁴cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×10⁹)÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T =3216×△A÷细胞数量

（4）按液体体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹ )÷V 样÷T =3216×△A

ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V 反总：反应体系总体积，200μL=2×10^-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min。

脂肪酸合成酶（FAS）活性试剂盒仅供科研！