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蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒

简要描述:蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒测定意义:SP(EC2.4.1.7) 要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷键,催化葡萄糖基转移到果糖 木糖 半乳糖和鼠李糖等,合成相应的葡萄糖基 聚糖 外,SP 还能催化氢/醌合成熊果苷,具有ji强的美白效果,在化妆品工业中具有重要应用。

  • 更新时间:2024-06-29
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:554

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH128
规格100管/96样、50管/48样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、紫外分光光度法

蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒说明书

微量法100T/96S

 测定意义:

SP(EC2.4.1.7) 要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷键,催化葡萄糖基转移到果糖 木糖 半乳糖和鼠李糖等,合成相应的葡萄糖基 聚糖 外,SP 还能催化氢/醌合成熊果苷,具有ji强的美白效果,在化妆品工业中具有重要应用

 

测定原理:

SP 能够以磷酸体,催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸 酶催化6-磷酸葡萄糖,在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用还原 NADP+生成 NADPH,导340nm光吸收值增测定 340nm 吸光度增 速率,即可算SP活性                                

 

自备实验用品及仪器:                                                               

天平温离心机  恒温水浴锅  紫外分光光度  /酶标仪    石英比色皿/96 孔板和蒸馏水                                                                                                

试剂组成和配制:                                                                        

    液体 100mL×1 瓶,4℃保存                                                    

缓冲液  液体 10mL×1 瓶,4℃保存                                                      

试剂一  液体 5mL×1 瓶,4℃保存                                               

试剂二  液体 1.5mL×1 支,4℃保存                                                     

试剂         液体 1mL×1 支,4℃保存                                               

试剂四     粉剂 1 支,-20℃避光保存,临用前 1mL 蒸水溶解                           

试剂五     粉剂 1 支,-20℃避光保存,临用前 1mL 蒸水溶解                           

试剂         粉剂 1 支,-20℃避光保存,临用前 2mL 蒸水溶解                           

试剂七  粉剂 1 支,-20℃避光保存,临用前 2mL 蒸水溶解                           

 

粗酶液提取:                                                                                  

1.      组按照组质g提液体  (mL)  15~10 的比例 建议约0.1g组,入1mL提液 进行冰浴匀浆,然后 10000g4℃,离心 10min,清测

2.      菌真菌按照胞数104 个提液体mL500~10001 的比例建议500万胞入1mL提液 ,冰浴超声波破碎胞率300w,超声 3         ,间隔7,总时间 3min然后10000g4℃,离心 10min,清置于冰测       

 

测定操作表:

 

1分光光度 /酶标仪预热 30min,调节波长 340nm 2、操作表

 





对照管


测定管










缓冲液  µL


85


65










试剂一  µL


50


50










试剂二  µL


3


3











试剂

µL


2


2










试剂四  µL


10


10










试剂五  µL


10


10











试剂

µL


20


20










试剂七  µL


20


20


















 

 

混匀,37℃水浴预热 5min

样本  µL


20

迅速混匀,于微   石英比色皿/96 孔板,对照管调零,测定 340nm 的初始值 A1,测定完立即放入 37℃水浴准确   2min,对照管调零,迅速测定 340nm 吸光值 A2,△A= A2- A1

 

SP 活性计算公式:

 

a.用微量石英比色皿测定的计算公式

 

1.    按照蛋白浓度 

 

酶活定义  37pH6.8 时,  毫克蛋白质  分钟催化产生 1nmol NADPH                      一个酶活单

SP 活性  nmol/min/mg   prot  =

A

÷V ÷Cpr÷T=804×A÷Cpr


×V


ε × d


 

 

2.  按照样本质            

 

酶活定义  37pH6.8 时,


 

 

克样本  分钟催化产生 1nmol NADPH               一个酶活单

 


 

SP 活性  nmol/min/g 鲜重    =

A

÷(V ÷V 样总×W)÷T=804×A÷W


×V


ε × d

 

3.    按照  胞数算

 

酶活定义  37pH6.8 时,            104     分钟催化产生 1nmol NADPH               一个酶活单

SP 活性  nmol/min/104   cell  =

A

÷(V ÷V 样总×

胞数

万个    )÷T=804×


×V


ε × d


 

 

  胞数            万个

ε       NADPH 摩尔消光系数,6220 L/mol/cm  d  比色皿光  1cm  V

 

  2mL V              应体系中样本体     0.2mL     W 样本质  g Cpr


 

 

         应体系总

 

蛋白浓度,mg/mL

 


 

T               应时间,2min

 

b. 96 孔板测定的计算公式

 

1.    按照蛋白浓度 

 

酶活定义  37pH6.8 时,  毫克蛋白质  分钟催化产生 1nmol NADPH                      一个酶活单

SP 活性  nmol/min/mg   prot  =

A

÷V ÷Cpr÷T=1608×A÷Cpr


×V


ε × d


 

 

3.  按照样本质            

 

酶活定义  37pH6.8 时,


 

 

克样本  分钟催化产生 1nmol NADPH               一个酶活单

 


SP 活性  nmol/min/g 鲜重    =

A

÷(V ÷V 样总×W)÷T=1608×A÷W


×V


ε × d

 

3.    按照  胞数算

 

酶活定义  37pH6.8 时,            104     分钟催化产生 1nmol NADPH               一个酶活单

SP 活性  nmol/min/104   cell  =

A

÷(V ÷V 样总×

胞数

万个    )÷T=1608×


×V


ε × d

 

  胞数            万个

ε      NADPH 摩尔消光系数,6220 L/mol/cm  d  比色皿光  0.5cm  V                                应体系总

 

  2mL V              应体系中样本体     0.2mL     W 样本质  g Cpr 蛋白浓度,mg/mL

 

T               应时间,2min

 

 

注意事项:

 

1.        粉剂-20保存,配制好的试剂 3 天内使用完

 

2.        可选用 BCA 法测定蛋白含  试剂盒测定蛋白含


蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒仅供科研!

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