您好!欢迎访问优利科(上海)生命科学有限公司网站!
全国服务咨询热线:

15021281375

当前位置:首页 > 产品中心 > 科研试剂盒 > 生化试剂盒 > 硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)试剂盒

硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)试剂盒

简要描述:硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)试剂盒测定意义:TrxR 是一种 NADPH 依赖的包含 FAD 结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员,与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR 与 GR 活性类似,催化 GSSG 还原生成 GSH,是谷胱/甘肽氧化还原循环关键酶之一。

  • 更新时间:2024-06-29
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:663

相关文章

Related Articles

详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH127
规格100管/96样、50管/48样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、可见分光光度法

硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)试剂盒说明书

 

微量法100T/96S

 

 

注 意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

 

 

测定意义:

 

TrxR 是一种 NADPH 依赖的包含 FAD 结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员,与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR GR 活性类似,催化 GSSG 还原生成 GSH,是谷胱/甘肽氧化还原循环关键酶之一。

 

 

测定原理:

 

TrxR 催化 NADPH 还原 DTNB 生成 TNB NADP+TNB 412 nm 有特征吸收峰,通过测定 412nm 波长处 TNB 的增加速率,即可计算 TrxR 活性。

 

自备仪器和用品:

 

低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸馏水。

 

 

试剂组成和配制:

 

试剂一:液体 120mL×1 瓶,4保存。

 

试剂二:液体 2mL×1 瓶,4避光保存。

 

试剂三:粉剂×1 管,4保存。临用前加入 2mL 蒸馏水溶解。

 

 

粗酶液提取:

 

1.        组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL) 15~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g4离心 10min,取上清置冰上待测。

 

2.        细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~10001 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 8000g4,离心 10min,取上清置于冰上待测。

 

3.        血清等液体:直接测定。

 

 

TrxR 测定操作:

 

1.    分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 412nm,用蒸馏水调零。

 

2.    试剂一在 25(一般物种)或者 37(哺乳动物)预热 30min

 

3.    空白管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,加入 20μL 试剂二,20μL 试剂三,160μL 试剂一,迅速混匀后于 412 nm 测定 10 s 310 s 吸光度,记为 A1 A2A 空白管=A2-A1

 

4.    测定管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,加入 20μL 试剂二,20μL 试剂三,140μL 试剂一, 20μL 上清液,迅速混匀后于 412 nm 测定 10 s 310 s 吸光度,记为 A3 A4A 测定管

 

=A4-A3

 

注意:空白管只需测定一次。

 

 

TrxR 活性计算公式:

 

(1). 按蛋白浓度计算

 

活性单位定义:在 25或者 37中,每毫克蛋白每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。

 

TrxRnmol/min /mg prot=A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V )÷T = 147×A 测定管-A 空白管)÷Cpr

 

(2). 按样本质量计算

 

活性单位定义:在 25或者 37中,每克样本每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。

 

 

TrxRnmol/min /g 鲜重)=A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总÷(W×V ÷V 样总)÷T

 

 

 

=  147×A 测定管-A 空白管)÷W

 

3)按细胞数量计算

 

活性单位定义:在 25或者 37中,每 104 个细胞每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶

 

活单位。

 

TrxRnmol/min/104 cell=A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V ÷V

 

)÷T

 

= 147×A 测定管-A 空白管)÷ 细胞数量

 

4)按液体体积计算

 

活性单位定义:在 25或者 37中,每毫升液体每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。

 

TrxRnmol/min /mL=A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总÷V ÷T

 

=  147×A 测定管-A 空白管)

 

εTNB 412nm 处的微摩尔消光系数,0.0136 L/μ mol/cmd:比色皿光径,1cmV 反总:

 

反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 LCpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;

 

W     :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02 mLV 样总:提取液体积,1 mLT:反应时间(min),5 min

 

b.使用 96 孔板测定的计算公式如下

 

(1). 按蛋白浓度计算

 

活性单位定义:在 25或者 37中,每毫克蛋白每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活

 

单位。

 

TrxRnmol/min /mg prot=A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V )÷T

 

=   294×A 测定管-A 空白管)÷Cpr

 

(2). 按样本质量计算

 

活性单位定义:在 25或者 37中,每克样本每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。

 

TrxRnmol/min /g 鲜重)=A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总÷(W×V ÷V 样总)÷T

 

=  294×A 测定管-A 空白管)÷W

 

3)按细胞数量计算

 

活性单位定义:在 25或者 37中,每 104 个细胞每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶

 

活单位。

 

TrxRnmol/min/104 cell=A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V ÷V

 

)÷T

 

= 294×A 测定管-A 空白管)÷ 细胞数量

 

4)按液体体积计算

 

活性单位定义:在 25或者 37中,每毫升液体每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。

 

TrxRnmol/min /mL=A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总÷V ÷T

 

=  294×A 测定管-A 空白管)

 

εTNB 412nm 处的微摩尔消光系数,0.0136 L/μ mol/cmd96 孔板光径,0.5cmV 反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 LCpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02 mLV 样总:提取液体积,1 mLT:反应时间(min),5 min

 

注意事项:

1.        测定前须先取 12 个样做预实验,使得吸光值在 5min 内程线性变化。哺乳动物组织及血液制品 TrxR 活力测定时,一般须用蒸馏水稀释 5 倍左右;测定过程操作须迅速。

2.        试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。

硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)试剂盒仅供科研!

 

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
优利科(上海)生命科学有限公司
地址:金大公路8218号1幢
邮箱:1431486511@qq.com
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息
Baidu
map