您好!欢迎访问优利科(上海)生命科学有限公司网站!
全国服务咨询热线:

15021281375

当前位置:首页 > 产品中心 > 科研试剂盒 > 生化试剂盒 > 胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)试剂盒

胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)试剂盒

简要描述:胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)试剂盒测定原理:
利用ICDHc催化NADP+还原成NADPH反应,在340 nm下测定NADPH浓度的增加。

  • 更新时间:2024-06-29
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:545

相关文章

Related Articles

详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH121
规格100管/96样、50管/48样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、紫外分光光度法

胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)试剂盒说明书

                                     微量法100/96

 

    意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

ICDHcEC 1.1.1.42)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸,同时还原NADP+生成NADPHICDHc是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种NADPH重要来源,在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。

 

测定原理:

利用ICDHc催化NADP+还原成NADPH反应,在340 nm下测定NADPH浓度的增加。

所需的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

 

试剂的组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4保存;

试剂一:液体19 mL×1瓶,4保存;

试剂二:粉剂×1瓶,4保存;

试剂三:粉剂×1瓶,-20保存;

 

样本的前处理:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

 

测定步骤:

1、  分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、   将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解;在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL试剂一,混匀后立即记录340nm20s后吸光值A1 2min20s后的吸光值A2计算ΔA=A2-A1

 

注意事项:

1、   A2-A1大于0.5,需将酶液用提取液稀释,使A2-A1小于0.5,可提高检测灵敏度。计算公式中乘以

 

       相应稀释倍数。

2、   A2-A1小于0.005,可延长反应时间到5min10min

 

ICDHc活力单位的计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)ICDHc活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

ICDHcnmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷V÷T=1608×ΔA

2、组织、细菌或细胞中ICDHc活力的计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

ICDHcnmol/min/mg prot=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

ICDHcnmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(W× V÷V样总) ÷T=1608×ΔA÷W

3 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmolNADPH定义为一个酶活力单位。

ICDHcnmol/min/104=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(500×V÷V样总) ÷T=3.216×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 LεNADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.01 mLV样总:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,2 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g500:细菌或细胞总数,500万。

 

b.96孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)ICDHc活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

ICDHcnmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷V÷T=3216×ΔA

2、组织、细菌或细胞中ICDHc活力的计算

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

ICDHcnmol/min/mg prot=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

ICDHcnmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(W× V÷V样总)  ÷T=3216×ΔA÷W

3 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmolNADPH定义为一个酶活力单位。

ICDHcnmol/min/104=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(500×V÷V样总) ÷T=6.432×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 LεNADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmd96孔板光径,0.5cmV样:加入样本体积,0.01 mLV样总:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,2 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g500:细菌或细胞总数,500万。


胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)试剂盒仅供科研!

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
优利科(上海)生命科学有限公司
地址:金大公路8218号1幢
邮箱:1431486511@qq.com
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息
Baidu
map