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6磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)测定试剂盒

简要描述:6磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)测定试剂盒测定意义:
磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)和6PGDH依次催化NADPH合成,与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外,6PGDH逆境生理中具有重要作用。

  • 更新时间:2024-06-29
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:554

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH119
规格100管/96样、50管/48样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、紫外分光光度法

6磷酸葡萄糖酸脱氢酶6PGDH测定试剂盒说明书

                                        微量法100T/96S

 

    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)和6PGDH依次催化NADPH合成,与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外,6PGDH逆境生理中具有重要作用。

 

测定原理:

6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPHNADPH340 nm有特征吸收峰,而NADP+没有;通过测定340nm吸光度增加速率,计算6PGDH活性。

 

自备仪器和用品:

低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、酶标仪、96孔板和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体19mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存。

 

粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为1000~50001的比例(建议2000万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定操作:

1. 酶标仪预热30min,调节波长到340 nm

2将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解;在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3. 96孔板,依次加入10μL样本190μL试剂一,于340nm处测定3min内吸光值变化,第10 s吸光值记为A1,第190s吸光值记为A2A=A2-A1

注意:空白管只需要做一次。

 

计算公式:

使用96孔板测定的计算公式如下

 

1、血清(浆)6PGDH活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟生成1 nmolNADPH定义为一个酶活力单位。

6PGDHnmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷V÷T=2143.6×ΔA

2、组织、细菌或细胞中6PGDH活力的计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

6PGDHnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=2143.6×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

6PGDHnmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(W× V÷V样总) ÷T=2143.6×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

6PGDHnmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(2000×V÷V样总) ÷T=1.072×ΔA

V反总:反应体系总体积,1×10-3 LεNADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmd96孔板光径,0.5cmV样:加入样本体积,0.05 mLV样总:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,3 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g2000:细菌或细胞总数,2000万。

6磷酸葡萄糖酸脱氢酶6PGDH测定试剂盒仅供科研!

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