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乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒

简要描述:乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定原理:LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

  • 更新时间:2024-06-29
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:650

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH116
规格100管/48样、50管/24样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、可见分光光度法

乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒说明书

微量法100/48

 

    正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

LDHEC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着NAD+/NADH之间互变。

 

测定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

 

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

 

试剂的组成和配制:

提取液:60mL×1瓶, 4保存;

试剂一:液体5 mL×1瓶, 4保存;

试剂二:粉剂×1支,-20保存,用时加入10μL试剂五和1.3 mL蒸馏水充分溶解备用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融

试剂三:液体5 mL×1瓶,4保存;

试剂四:液体20 mL×1瓶,4保存;

试剂五:液体100μL×1支,4保存;

 

样品测定的准备:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为1000~50001的比例(建议2000万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

 

测定步骤:

1、  分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm,蒸馏水调零。

2、样本测定(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称(μL)

测定管

对照管

样本

10

10

试剂一

50

50

试剂二

10


蒸馏水


10

充分混匀,37(哺乳动物)或25(其它物种)准确水浴15min

试剂三

50

50

充分混匀,37(哺乳动物)或25(其它物种)准确水浴15min

试剂四

150

150

充分混匀,室温静置15min 450 nm下测定吸光度,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需要设一个对照管。

 

LDH活力单位的计算:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.9108x+0.0037   (x为标准品浓度,umol/mLy为ΔA)

2、血清(浆)LDH活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDHnmol/min/mL=ΔA-0.0037÷0.9108÷T×103=73.2×ΔA

3、细胞、细菌和组织中LDH活力的计算

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDHnmol/min/mg prot=[ΔA-0.0037÷0.9108×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =73.2×ΔA÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

2 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDHnmol/min/g鲜重=[ΔA-0.0037÷0.9108×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =73.2×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDHnmol/min/104 cell= [ΔA-0.0037÷0.9108×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.037×ΔA

V1:加入反应体系中样本体积,0.01mLV2:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,15 minCpr:蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g2000:细胞或细菌总数,2000万;1031umol/mL=103 nmol/mL

 

b. 使用96孔板测定的计算公式如下:

1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.4554x+0.0037   (x为标准品浓度,umol/mLy为ΔA)

2、血清(浆)LDH活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDHnmol/min/mL=ΔA-0.0037÷0.4554÷T×103=146.4×ΔA-0.0037

3、细胞、细菌和组织中LDH活力的计算

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDHnmol/min/mg prot=[ΔA-0.0037÷0.4554×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =146.4×ΔA-0.0037÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

2 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDHnmol/min/g鲜重=[ΔA-0.0037÷0.4554×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =146.4×ΔA-0.0037÷W

 

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDHnmol/min/104 cell= [ΔA-0.0037÷0.4554×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.073×ΔA-0.0037

V1:加入反应体系中样本体积,0.01mLV2:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,15 minCpr:蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g2000:细胞或细菌总数,2000万;1031umol/mL=103 nmol/mL

1、   标准曲线线性范围为:0.1 umol/mL -2 umol/mL

2、   ΔA线性范围为:0.01 -1


乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒仅供科研!

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