大鼠胚胎肢芽间充质干细胞
产品名称 ：大鼠胚胎肢芽间充质干细胞
产品货号 ：YLK-XB1268h
组织来源 ：胚胎组织
产品规格 ：5×105cells/T25细胞培养瓶
细胞简介：
胚胎肢芽间充质干细胞分离自胚胎肢芽；胚胎肢芽存在于两栖类以上的大多数脊椎动物胚胎中，在四肢发生的初期阶段，在身体两侧有呈芽状的突起，内部是中胚层侧板的体壁板垱厚形成，表面有表皮覆盖。在这个中胚层区肢芽迅速伸长，不久，在其前端即见有指的突起。在此时期间，其内部的中胚层分化成软骨、肌肉等。这些分化组织，在将肢芽作分离培养的时候也可以获得。根据对两栖类的有尾类的研究，作为肢原基各部的胚发能力，肢芽物质的大部分是位于背半部，而前半部主要参与基部形成，后半部参与前端的形成。在实验上，即使将肢的原基分成二半，每一半调整好都可形成基本上近于正常形态的肢体，而且肢体各轴的极性和侧性也逐渐决定。
间充质干细胞(M SC )是属于中胚层的一类多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，是具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞；这些细胞可以通过分裂维持自身细胞的特性和数量，并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞，从而在组织修复等方面发挥积极作用。
质量检测
优利科生物实验室分离的该细胞经Vim entin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息
培 养 基 ：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptom ycin等
换液频率 ： 每2-3天换液一次
生长特性 ： 贴壁 细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 ： 可传3-5代左右
传代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白/酶
培养条件 ： 气相：空气，95% ；C O2，5%
该细胞体外培养周期有限。建议使用优利科生物配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1) 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃温浴1-3min。倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完培终止消化。
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。
4) 待细胞贴壁后，培养观察。之后按照换液频率更换新鲜的完培。
3. 细胞收货脱落
1) 收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)。消化完向离心管内加入5ml完培终止消化。
3) 经1000rpm离心5min丢弃上清，用5ml完培基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内。
4) 待细胞贴壁后，培养观察。之后按照换液频率更换新鲜的完培(37℃预热)。
5) 原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验。包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中，胰/酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
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