L4440质粒

感谢您选择优利科（上海）生命科学有限公司提供的微生物菌种。本中心目前有标准菌种（斜面、甘油菌、穿刺菌和冻干粉四种形式）、基因工程菌种 （斜面、甘油菌和穿刺菌三种形式）、食用益生菌和工业发酵菌种，基本涵盖了环境、工业、农业、分析、食品、药用真菌等各类生产和科研微生物。微生物总种类达到 2000 多种，并且该数量每天正在不断增加。

菌种简介：

培养基名称：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)

生长条件：LB +氨苄青霉/素，37℃（克隆菌株DH5α，2790bp）

存储条件：2-8℃

安全等级：0

操作步骤：

1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；

2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min；

3.热激导入： 42℃静置 90s；

4.收缩膜孔： 冰浴 2min；

5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；

6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。

7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。

提供形式：质粒干粉

菌种培养注意事项：

1.微生物菌种应保存于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

2.菌种操作在无菌条件下进行，接种完毕应该灭菌再做丢弃处理；

3.斜面菌种和穿刺菌种保存时间通常为 3-6 个月，应根据菌种状况及时结转；冻干粉保存时间通常是 2-25 年；甘油菌保  存时间为 2-5 年;

4.冻干首-次活化,干粉要全部用完，不能保留。用0.2-0.5m1的培养液或者无菌水溶解,接种在1-2个平板上，因冻干菌种处于休眠状态,请勿接种多个平板，以免因接种量不足而导致复苏不成功。

5.如果有不明白之处，应先与我中心联系，避免不必要的损失。

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