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猴痘病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

简要描述:猴痘病毒染料法荧光定量PCR试剂盒猴痘病毒(Monkey Pox Virus,MPV)会引起猴痘,是一种罕见的病毒性疾病,主要发生于中部与西部非洲热带雨林国家。

  • 更新时间:2024-07-17
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:176

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10366P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
英文名称Monkey Pox Virus(MPV) SYBR qPCR Kit保存条件低温运输,-20℃保存
有效期12个月试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

猴痘病毒染料法荧光定量PCR试剂盒


商品名称:猴痘病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

Name     :Monkey Pox Virus(MPV) SYBR qPCR Kit

猴痘病毒(Monkey Pox Virus,MPV)会引起猴痘,是一种罕见的病毒性疾病,主要发生于中部与西部非洲热带雨林国家。该病于1958年首ci在丹麦哥本哈根一实验室绿猴中发现,可引起实验用灵长类动物发病,许多非洲啮齿动物也都有猴痘病毒感染。该病毒也可感染小鼠、大鼠和兔。1970年刚果首ci报告猴痘病毒感染人类的病例。该病毒对人和动物健康造成较大损害,因此猴痘病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用,为此本公司开发了简单快捷的猴痘病毒染料法荧光定量PCR检测试剂盒,它具有下列特点:

1.       即开即用,用户只需要提供病毒样品。

2.      根据猴痘病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。

3.      灵敏度可以达到几百拷贝/反应。

4.      一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。

5.      本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。

6.      本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。

【试剂组成】

包装规格

50T/盒

2×qPCR MagicMix

500μL(棕色管)

荧光PCR专用模板稀释液

1 mL(黄盖)

猴痘病毒PCR引物混合物

100μL(白盖)

猴痘病毒PCR阳性对照(1×10E8 拷贝/μL)

50μL(红盖)
DNA病毒裂解液(试用装)15次(9 mL
使用手册1份
【储存条件及有效期】

低温运输、-20℃保存,有效期一年


【自备试剂】

DNA模板、10×ROX(根据机型决定,具体见使用方法)。


【使用方法】

一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL610倍稀释度为例)

注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA

1.       片段作为阳性对照。

2.      标记6个离心管,分别为765432

3.      用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(最好用带芯枪头,下同)。

4.      7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

5.      换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

6.      换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

7.      重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

8.       如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为10E4 拷贝/μL10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为10E5 拷贝/μL10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PCNC的体积也必须是200μL

9.      用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA/提取试剂盒兼容。

三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)

10.      如果只做1次重复,则标记N+9PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加23倍。

11.      在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):

成分

样品管

N+2

PCR阴性对照管

PCR阳性

对照管(2-7管)

2×qPCR MagicMix

(棕色管)

10 μL

10 μL

10 μL

猴痘病毒PCR

引物混合液(白盖)

2 μL

2 μL

2 μL

自备10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

2 μL

N+2待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

7步所得PCR阳性对照

稀释液(2-7号)

不加

不加

6μL2号样到2号管,3号样到3号管

:ABI750077007900仪器需要使用ROX作为对照,其他荧光PCR仪器(如iCycler IQMJ OptionMJ Chromo4MX3000MX4000RotorGene 3000RotorGene 6000LightCycler480)不需要使用ROX,则用水替代。

12.       盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。

过程

温度

时间

预变性

95℃

5分钟

PCR反应

30个循环)

95℃

60

56

60

76

60



13.       数据采集

具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA时,最大吸收光谱在471 nm,结合DNA时的最大吸收光谱在500 nm,最大发射光谱在530 nm。信号采集可以设置在复性或延伸步骤。

四、数据处理

14.       如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。

      15.       如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。

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