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新型布尼亚病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

简要描述:新型布尼亚病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒新型布尼亚病毒,卫生部门从蜱虫中毒者体内分离出的病毒。或将被认定为一种新型病毒。

  • 更新时间:2024-07-18
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:212

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10408P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

新型布尼亚病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒


产品名称:新型布尼亚病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

英文名称:Novel Bunyavirus Probe qRT-PCR Kit

新型布尼亚病毒,卫生部门从蜱虫中毒者体内分离出的病毒。或将被认定为一种新型病毒。从目前来看,这一病毒主要由蜱传播,且可以治疗,病死率很低。目前未发现人传染人的病例。布尼亚病毒自然感染见于许多脊椎动物和节肢动物 (蚊、蜱、白蛉等),可感染小鼠,并能在一些哺乳类、鸟类和蚊细胞培养中生长;   对人可引起类似流感或登革热的疾病、出血热(立夫特谷热和克里米亚─刚果出血热等)及脑炎(加利福尼亚脑炎)。有蚊媒、蜱媒、白蛉媒 3 种传播类型。本产品以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测新型布尼亚病毒的试剂盒, 它具有下列特点:

1.    即开即用,用户只需要提供样品 RNA 模板。

2.    引物和探针经过优化,灵敏性高。

3.    提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4.    特异性高,引物是根据新型布尼亚病毒高度保守区设计,不会跟其他病毒的

RNA 发生交叉反应。

5.    本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。

6.    本产品只能用于科研。


【试剂组成】

成分

十孔盒包装

探针法 qRT-PCR 缓冲液

500 μL蓝盖

探针法 qRT-PCR 酶混合液

100 μL红盖

荧光PCR 专用模板稀释液

1 mL黄盖

新型布尼亚病毒探针法 qRT-PCR

引物混合液

100 μL(白盖)

新型布尼亚病毒 qRT-PCR 探针

50 μL棕色管

新型布尼亚病毒探针法 qRT-PCR

阳性对照

(1×10E8 拷贝/μL)

50 μL黄盖

使用手册

1

【运输及保存】

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。


【自备试剂】

样品 RNA。


【注意事项】

一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。

由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2.    用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。

3.    在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.    换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.    换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.   重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 RNA 的制备

7.    如果有 N 个样品,最好设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳

性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL 阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样, 以此作为PC。另外用水作为 NC。

8.    用自选方法纯化样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA/提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。

三、Probe qRT-PCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9.    如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于 PCR 阳性对照(用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.    在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好

后最后加):

成分样品管N+2个RT-PCR阴性对照管标准曲线样品管(2-7管)
探针法 qRT-PCR 缓冲液各 10 μL10 μL各 10 μL
探针法 qRT-PCR 酶混合液各 2 μL 2 μL各 2 μL
新型布尼亚病毒 qRT-PCR 探针各 1 μL 1 μL各 1 μL

新型布尼亚病毒探针法 qRT-PCR引物混合液

各 2 μL 2 μL各 2 μL
待测样品 RNA 模板各 5 μL--
超纯水
5 μL-

第 7 步所得标准曲线样品稀释液(2-7 号)

--

各 5 μL(2号样到 2 号管,3 号样到3 号管…)









11.    盖上盖子后上机,按下面参数进行 qRT-PCR:

过程

温度

时间

逆转录

50℃

30 min

预变性

94℃

10 min

qRT-PCR 反应

40 个循环

94℃

15 sec

60℃

1 min采集 FAM 通道的荧光信号

五、数据处理

12.    如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。

13.    如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 35,则为阳性。

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